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流式检测

流式检测

一、项目介绍

  流式细胞术是运用流式细胞仪对细胞或颗粒进行光谱鉴定、细胞分选、计数,广泛用于分析细胞表面和细胞内分子的表达水平、鉴定样品中细胞群的不同细胞类型、评估各细胞亚群的纯度以及分析细胞大小和内含颗粒。主要利用荧光标记的抗体检测蛋白水平,或结合了特定细胞分子的荧光染料,如PI与 DNA 的结合。

二、应用

  常用于细胞表面分子如表面标记物的鉴定及水平分析,以鉴定、定性或定量特定类群的细胞,可以检测细胞内蛋白表达水平,可以利用特定染料分析细胞周期、细胞凋亡,利用线粒体电位染料分析线粒体膜电位,利用DHE等染料检测细胞内ROS水平。

三、流式细胞仪通道

  流式细胞仪Beckman Coulter CytoFLEX;光学参数:FSC(前散射)、SSC(侧散射)、4色荧光通道;数据采集软件:CytExpert。

激发波长 通道 发射波长 常见染料
488 nm FL1 525±20 nm FITC、EGFP、CFSE、AlexaFluor 488
FL2 585±21 nm PE、PI、DsRed
FL3 690±25 nm PerCP-Cy5.5、PC5
638 nm 660±10 nm APC、Alexa Fluor 647

四、结果展示

细胞周期

细胞凋亡

ROS检测

JC-1线粒体膜电位

五、样品保存运输

  1、流式样本接收注意事项

  ①细胞凋亡

  需要活细胞(外地样本不接)。如果细胞带荧光,一定要在交接单和培养板上备注,否则按照无荧光处理。如果因此导致检测结果不可用及样本浪费,我方概不负责,也不接受退单。

  ②细胞周期

  周期需要细胞量比较多,6 孔板送样要求汇合度在70%以上,但不能超过90%。外地样品,需用预冷的70% 乙醇固定过夜后(贴壁细胞需要消化后进行固定),离心弃固定液,加1ml PBS重悬,封口膜封好,4℃运输寄到实验室。

  ③流式JC-1

  需要活细胞(外地样本不接)。细胞汇合度高于70%(6 孔板),多提供2 个空白孔,做阴性和阳性对照。如果细胞带红光或绿光,不能检测。

  ④ 流式ROS

  需要活细胞(外地样本不接)。细胞汇合度高于70%(6 孔板),多提供2 个空白孔,做阴性和阳性对照。如果细胞带绿光,不能检测。

  ⑤细胞表抗

  提前确定公司是否有相应流式抗体(组化抗体不可用),其他抗体需要客户自己提供(外地样本不接)。

  ⑥ 流式三标

  提前告知样本具体数量和类型(血液或脾脏~)。血样用抗凝管收集(胞内染色至少需要1.5 ml,表抗需要约1 ml),注意防止凝血,4℃保存运输。血样4℃保存最多只能存放一周,时间越久实验结果越差。取血后,需尽快寄到实验室;取脾脏时尽量将动物带到实验室,直接在实验室取材后开始实验,若不能将动物带到实验室,取材(整个脾脏)后将组织放在含有PBS 的EP 管或离心管中,4℃保存,提细胞必须在取材后6 小时以内完成,注意有些检测指标(Treg,TH1, TH2 等)需无菌提取。外地样本不接。

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